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反相色譜柱:一種高效液相色譜分離技術(shù)
反相色譜柱:一種高效液相色譜分離技術(shù)
更新時間:2023-10-25 點擊次數(shù):670
反相色譜柱是一種常用的高效液相色譜(HPLC)分離技術(shù),主要用于分離和分析極性或中等極性的化合物,如氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽、核酸等。該色譜柱具有較高的分離效率和良好的峰形,是生物樣品分離和分析中常用的技術(shù)之一。
它的原理:
反相色譜柱
的原理是基于不同化合物在固定相和流動相之間的分配平衡。反相色譜柱的固定相通常是由硅膠或聚合物顆粒制成,表面鍵合有疏水基團,如C8、C18等。在反相色譜中,流動相為極性溶劑,如水、甲醇、乙腈等,而固定相的疏水基團與流動相中的溶劑分子相互作用,使得不同化合物在固定相和流動相之間的分配達到平衡。由于不同化合物的疏水性質(zhì)和極性不同,它們在色譜柱上的保留時間和洗脫順序也會有所不同,從而實現(xiàn)分離。
它的選擇和使用:
反相色譜柱的選擇和使用對于樣品的分離和分析結(jié)果至關(guān)重要。以下是選擇和使用它時需要注意的事項:
1.固定相和鍵合相的選擇:根據(jù)需要分離的化合物性質(zhì)選擇適合的固定相和鍵合相。對于極性較大的化合物,可以選擇C18或C8鍵合相;對于極性較小的化合物,可以選擇C3或C4鍵合相;
2.流動相的選擇:根據(jù)需要分離的化合物性質(zhì)選擇適合的流動相。常用的流動相包括水、甲醇、乙腈等。還可以加入調(diào)節(jié)劑,如甲酸銨、乙酸銨等,以改善分離效果;
3.流速和進樣量:適當調(diào)整流速和進樣量可以提高分離效果。通常,流速越慢,分離效果越好;進樣量應(yīng)根據(jù)色譜柱容量和分離效果來選擇;
4.溫度:溫度可以影響化合物的溶解度和擴散速率,從而影響分離效果。通常,升高溫度可以加快分離速度,但也會影響化合物的保留時間和峰形。
總之,反相色譜柱是一種常用的高效液相色譜分離技術(shù),具有較高的分離效率和良好的峰形。
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